okręgowy szpital kolejowy katowice ligota ad

Charakterystyka kliniczna 14 biorców allogenicznych przeszczepów szpiku kostnego, którzy są poddawani wstępnej immunoterapii adopcyjnej. Osiemnastu pacjentów poddanych przeszczepowi allogenicznego szpiku kostnego identycznego z HLA od dawcy związanego z CMV-seropozytywnym w Centrum Badań nad Rakiem Freda Hutchinsona włączono do badania oceniającego immunoterapię adoptywną klonami limfocytów T CD8 + swoistych dla CMV, rozpoczynających się od 30 do 40 dni po transplantacji szpiku . Badanie zostało zatwierdzone przez komisję odwoławczą instytucji, a wszyscy pacjenci wyrazili świadomą zgodę. Czterech pacjentów nie otrzymywało infuzji limfocytów T: dwóch zmarło przed 30 dniem, a dwóch nie kwalifikowało się z powodu toksyczności narządu III stopnia. Żaden z pacjentów nie otrzymał leczenia profilaktycznego gancyklowirem lub immunoglobuliną. Tabela przedstawia charakterystykę kliniczną 14 leczonych pacjentów. Generacja i charakterystyka klonów
Poliklonalne cytotoksyczne limfocyty T-specyficzne dla CMV ustalono jak opisano gdzie indziej.24,27 Próbki pobrane z biopsji skóry pobierano od każdego dawcy szpiku w celu ustalenia linii fibroblastów do zastosowania jako stymulator i komórki docelowe. Jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (PBMC) uzyskano od dawcy i hodowano z autologicznymi fibroblastami zakażonymi szczepem CMV AD169. Pożywką hodowlaną dla komórek T była RPMI, uzupełniona 25 mmolami buforu Hepes na litr; 11 procent AB-dodatnich surowicy seronegatywnej CMV od zdrowych dawców krwi; 4 mmol l-glutaminy na litr; 50 jednostek penicyliny na mililitr; 50 .g streptomycyny na mililitr; i 2,5 x 10-5 moli 2-merkaptoetanolu na litr roztworu. Komórki T CD8 + sklonowano z hodowli metodą ograniczającego rozcieńczania po 7 do 14 dniach, w zależności od tego, czy wykrywano specyficzną dla CMV aktywność cytolityczną w hodowanych komórkach.24,27.
Klony limfocytów T cytotoksycznych CD8 + swoiste dla CMV wyizolowano przez zubożenie hodowli komórek T CD4 + za pomocą kolb pokrytych przeciwciałem monoklonalnym anty-CD4 + (Applied Immune Sciences, Santa Clara, Calif.) I wysianie komórek T CD8 + w 96 – do płytek o okrągłym dnie (0,3 do 0,8 komórek na studzienkę) z 50 000 autologicznych komórek PBMC promieniami gamma (30-Gy) (PBMCir), 10 000 promieniowanych promieniami gamma (80 Gy) autologicznych limfoblastów B transformowanych EBV (LCLir) jako odżywki komórki i 25 do 50 U interleukiny-2 na mililitr. Przeciwciało monoklonalne anty-CD3 (30 ng na mililitr) lub autologiczne fibroblasty zakażone CMV (2000 na studzienkę) dodano w celu stymulacji komórek T.24,27 Klony przeniesiono do większych studzienek lub kolb do hodowli tkanek, a ich liczba była zwiększone do ponad miliarda poprzez cykliczną stymulację w odstępach 10 do 12 dni albo autologicznymi zakażonymi CMV fibroblastami albo monoklonalnym przeciwciałem anty-CD3 w hodowlach uzupełnionych PBMCir i LCLir, z interleukiną-2 dodaną w dniach 1, 5, i 8 po stymulacji. Ekspresję CD3, CD4 i CD8 określono przy pomocy sortera komórek aktywowanych fluorescencyjnie, a klony limfocytów T cytotoksycznych CD3 + CD8 + CD4- wybrano do stosowania w terapii27. Sterylność hodowli potwierdzono przed każdą infuzją. Klony komórek T od wszystkich 18 dawców zostały z powodzeniem wygenerowane do terapii.
Test na cytotoksyczność
Klony testowano pod kątem aktywności cytolitycznej ograniczonej do HLA specyficznej dla CMV w pięciogodzinnym oznaczeniu uwalniania chromu.17,19. Komórki docelowe były autologicznymi i błędnie zakażonymi infekowanymi CMV lub zainfekowanymi CMV fibroblastami inkubowanymi przez 48 godzin z 100 U rekombinowanego interferonu gamma (Boehringer-Mannheim, Indianapolis) na mililitr w celu zwiększenia czułości testu.28 Spontaniczne uwalnianie chromu, maksymalne uwalnianie i odsetek zabitych komórek zakażonych CMV (liza specyficzna) obliczono jak opisano w innym miejscu. .17,19,24 Klony cytotoksycznych limfocytów T, które lizowały więcej niż 30 procent autologicznych komórek docelowych zakażonych CMV i mniej niż 5 procent kontrolnych komórek docelowych o stosunku efektor: cel 5: były stosowane w terapii.
[patrz też: korona cyrkonowa, psychoterapia bielsko biała, internista mińsk mazowiecki ]