ginekolog katowice sokolska cd

Klony limfocytów T cytotoksycznych CD8 + swoistych dla strukturalnych białek wirionowych zidentyfikowano przez ich zdolność do lizy komórek docelowych zakażonych CMV w obecności daktynomycyny, aby zapobiec ekspresji genów wirusowych i te klony zostały wybrane do zastosowania w terapii. Schemat leczenia
Klony cytotoksycznych limfocytów T swoistych dla CMV podawano każdemu biorcy przeszczepu szpiku dożylnie przez 30 minut za pomocą cewnika Hickmana w czterech rosnących dawkach (33 miliony, 100 milionów, 330 milionów i miliard komórek na metr kwadratowy powierzchnia ciała), każda z nich w odstępie jednego tygodnia. Rozpoczęcie leczenia przez ponad 30 dni po transplantacji ułatwiło rozróżnienie efektów toksycznych związanych z infuzjami limfocytów T z wcześniejszych efektów toksycznych z powodu chemioterapii warunkowej.
Monitorowanie pacjentów
Pierwszych trzech pacjentów otrzymało każdą infuzję limfocytów T w szpitalu, gdzie ich objawy życiowe i nasycenie tlenem były monitorowane przed infuzją oraz 15, 30, 60 i 120 minut po rozpoczęciu wlewu. Pozostałych 11 pacjentów leczono w oddziale ambulatoryjnym i monitorowano w ten sam sposób. Uzyskano pełną morfologię krwi, a czynność wątroby oceniano jeden dzień po każdej infuzji i trzy razy w tygodniu aż do dnia 100. Radiogramy klatki piersiowej uzyskano jeden dzień po każdej infuzji, a badania fizyczne wykonywano co tydzień. GVHD oceniono na podstawie opublikowanych kryteriów.29
Monitorowanie immunologiczne
PBMC zebrano przed rozpoczęciem infuzji komórek T, 2 dni po każdej infuzji oraz 2, 4, 6 i 12 tygodni po zakończeniu terapii. Krótkotrwałe hodowle wytworzono z PBMC i testowano pod względem aktywności CD8 + cytotoksycznej limfocytu T specyficznej wobec CMV. Aktywność specyficznych względem CMV komórek pomocniczych T CD4 + T w PBMC oceniano również przez wysianie 200,000 PBMC w trzech powtórzeniach w 96- dobrze okrągłodenne płytki z samą pożywką, antygenem CMV lub fitohemaglutyniną (5 .g na mililitr). 17 Dołki pulsowano trytowaną tymidyną (1 .Ci na dołek) przez ostatnie 16 godzin 96-godzinnej inkubacji; komórki następnie zebrano do zliczania scyntylacyjnego .. Dane dotyczące odpowiedzi limfocytów T transformowano do indeksu stymulacji, zdefiniowanego jako średnia liczba zliczeń na minutę (cpm) dla komórek eksponowanych na antygen CMV podzielona przez średnią liczbę zliczeń na minutę dla komórek eksponowanych tylko na pożywkę do hodowli tkankowej. .
In Vivo Trwałość ulegających adopcji klonów CD8 +
Zastosowano reakcję łańcuchową polimerazy z odwrotną transkryptazą (PCR) w celu zidentyfikowania zmiennych genów (V. i V.) receptora limfocytów T eksprymowanych przez wlewane klony cytotoksycznych limfocytów T i klony izolowane od pacjentów po infuzji. RNA wyizolowano z klonów za pomocą zestawu do separacji całkowitego RNA (Clonetech, Palo Alto, CA) i do 2 .g całkowitego RNA poddano odwrotnej transkrypcji do pierwszej nici komplementarnego DNA (cDNA) .30 Segmenty Geny V. i V. ekspresjonowane w próbkach cDNA przygotowanych z każdego klonu oznaczano za pomocą starterów 25. V. Dla 24 znanych głównych rodzin V. (Clonetech) i 31. V. Starterów, z 3. Starterami pochodzącymi z odpowiedniej stałej (C. I C. ) sekwencje.31
Monitoring wirusologiczny
Fiolka z muszli i konwencjonalne hodowle kożuszka, moczu i gardła dla CMV były monitorowane co tydzień aż do dnia 100.
Wyniki
Bezpieczeństwo Adoptive Transfer Clones specyficznych dla CMV
Żaden pacjent nie miał istotnych zmian ciśnienia krwi, częstości pracy serca, temperatury ani nasycenia tlenem podczas infuzji komórek T
[hasła pokrewne: rezonans magnetyczny ceny, korona cyrkonowa, korona cyrkonowa cena ]